Dna测序流程 基本测序过程:
测序接收的样品主要一般有四类:菌、质粒、已纯化PCR和PCR原液。实验室收到样品后,首先对客户填写的定单进行确认和补充。(客户姓名、单位地址、邮箱、电话、样品编号、引物编号、反应数)。然后根据不同的样品类型对样品进行分类编号。
1. 测序前处理:
◆菌样:将当天收取的菌样进行接种培养,过夜培养后用试剂盒进行质粒提取。将提出的质粒跑琼脂糖胶鉴定质粒浓度,达到本中心规定浓度的质粒交下一组实验,未达到规定浓度的质粒和未摇出菌的样品,作好记录后重新摇菌并提取质粒,对于两次未能提出质粒或不能摇出菌的样品,不再重复实验,E-MAIL给客户,建议客户重新挑取新的克隆样品后测序。
◆PCR原液:将PCR原液上样于纯化胶后电泳检测,对浓度较高的样品进行切胶用胶回收试剂盒回收,去除PCR引物、酶和其他杂质。然后电泳检测样品浓度,达到规定浓度的PCR样品交下一组实验。浓度不高的样品将停止实验,(注:电泳后有多条带和有弥散带的样品也将停止实验,因为这样的样品通常不能得到好的测序结果)。
◆质粒和PCR已纯化样品:将质粒和PCR已纯化样品直接电泳检测浓度,对于不能达到规定浓度的样品将停止实验。达到规定浓度的样品交下一组实验。
2.测序反应:
将处理好的DNA模板经鉴定确定浓度,做PCR测序反应,PCR反应结束后经过一系列的纯化过程将酶、荧光染料、引物和其他离子去除。
3.上ABI 3730测序仪做毛细管电泳。
4.测序结果分析:
测序仪将自动分析电泳样品的DNA序列。之后我们的分析人员对测序结果再次进行分析校对,数据分析完毕马上将结果通过E-MAIL发送给相应的客户。如果客户的测序结果有问题,我们将对结果进行分析并提出解决建议。
5.客服: 如果客户需要查询测序结果或咨询测序相关问题,可以通过电子邮件或电话与我们联系,我们设有专业的客服人员为您提供服务。 |