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产品与技术 DNA合成
DNA合成方法:
目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。
    亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3’端向5’端合成的,相邻的核苷酸通过3’→5’磷酸二酯键连接。
第一步:将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应,脱去其5’-羟基的保护基团DMT,获得游离的5’-羟基;
第二步:合成DNA的原料,亚磷酰胺保护核苷酸单体,与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3’端被活化,5’-羟基仍然被DMT保护,与溶液中游离的5’-羟基发生缩合反应。
第三步:带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5’-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在纯化时分离掉。
第四步:在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。
    经过以上四个步骤,一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的5’-羟基上的保护基团DMT,重复以上步骤,直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。
我们的产品及服务:
    我中心根据客户的不同要求,提供三种不同级别的DNA产品:
1、OPC纯化
OPC纯化是使用一种叫Cartridge的反向层析柱,根据DNA保护基(DMTr基)和层析柱中树脂间的亲和力作用的原理进行纯化目的DNA片段。OPC法适合纯化较短的引物,推荐仅用于30mer以下引物的纯化,适用于PCR用引物,DNA测序用引物,各种探针等。
2、PAGE纯化
PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对DNA片段进行分离,然后从凝胶中回收目的DNA的方法。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法,对长链OligoDNA(大于50mer)的纯化特别有效。适用于PCR用引物,DNA测序用引物,基因克隆用引物,各种探针等。
3、HPLC纯化
    采用高效液相色谱纯化,产物纯度极高,且操作重复性很好,人工原因造成的误差最小,得到的引物质量最为稳定可靠。适用于各种基因工程试验,特别是:荧光标记DNA、长链DNA、PCR克隆,定点突变,人工合成基因等。
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